thérapies ciblées dans les tumeurs rhabdoïdes

contexte scientifique : les tumeurs rhabdoïdes (rt) sont des cancers agressifs du nourrisson, de diagnostic histologique difficile, caractérisées biologiquement par une inactivation biallélique du gène supresseur de tumeur smarcb1, et histologiquement par une perte d'expression de cette protéine ubiquitaire. ces tumeurs posent actuellement deux problèmes cliniques: 1, un problème nosologique et, ou de diagnostic différentiel avec d'autres tumeurs smarcb1-déficientes de plus en plus fréquemment décrites depuis la généralisation du recours à l'immunohistochimie anti-smarcb1., 2, un très mauvais pronostic malgré des traitements intensifs descriptif du projet : pour mieux décrire les mrt, nous envisageons de réaliser une étude comparative des transcriptomes de tumeurs smarcb1-déficientes d'histologies variées (mpnst épithélioïdes, sarcomes épithélioïdes...). nous comparerons le transcriptome de ces tumeurs avec celui déjà obtenu pour une quarantaine de tumeurs rhabdoïdes humaines. nous chercherons ainsi à identifier les caractéristiques communes, mais aussi les éventuelles spécificités de chaque type histologique. une définition plus précise de l'entité rhabdoïde ainsi redéfinie devrait permettre de résoudre certains problèmes de diagnostics difficiles, mais aussi d'apporter des pistes de traitement ciblé. cette définition biologique des rt doit aussi permettre de valider la fidélité des modèles murins. en effet, les modèles murins actuellement publiés de knock-out de smarcb1 développent, pour une minorité d’entre eux, des tumeurs smarcb1-déficientes dont le phénotype ne semble pas récapituler parfaitement celui des rt. nous avons donc mis au point un modèle murin d'inactivation inductible de smarcb1 (flox, flox-cre-ert) développant constamment en 10-12 semaines des tumeurs smarcb1-déficientes, de phénotype très proche des rt humaines. des analyses comparatives des transcriptomes de tumeurs humaines et murines sont en cours pour valider les homologies. nous utiliserons ce modèle pour développer des stratégies de thérapeutique expérimentale. le traitement in vivo sera précédé d'études in vitro sur des lignées cellulaires de rt- nous étudierons l'effet sur le cycle et l'apoptose de nombreux composés chimiques, médicaments en utilisant la plateforme de screening haut débit biophenics (institut curie). nous poursuivrons également l'identification de gènes synthétiques létaux pour smarbc1. pour cela, nous infecterons des lignées cellulaires de rt, modifiées pour exprimer smarcb1 de façon contrôlée, par une large librairie de shrna. des voies de signalisation candidates à un traitement ciblé pourront in fine orienter l’usage de certaines molécules. enfin, nous étudierons l'efficacité en termes de survie des souris, mais aussi en termes de réponse tumorale (suivi par imagerie) et de biologie des tumeurs traitées. résultats attendus : la forte pénétrance tumorale de notre modèle murin et la rapidité d’apparition des tumeurs en font un modèle très adapté pour des thérapeutiques expérimentales. par screening haut débit sur les lignées cellulaires, nous identifierons les molécules, médicaments offrant le meilleur rationnel pour être testés sur ce modèle. nous pensons développer ainsi une stratégie très efficace pour préparer des essais précoces en clinique pédiatrique. dans le même temps, nous attendons des études comparatives des diverses tumeurs smarcb1-déficientes une meilleure compréhension des effets spécifiques de l’inactivation de ce gène dans les tumeurs rhabdoïdes, et de potentiels nouveaux marqueurs diagnostiques de cette entité ainsi redéfinie, afin d’aider à résoudre un réel problème nosologique en pathologie pédiatrique

scientific context: rhabdoid tumors (rt) are aggressive cancers of infancy, frequently misdiagnosed, characterized i) biologically by the biallelic inactivation of the tumor suppressor gene smarcb1, and ii) histologically by the loss of expression of this ubiquitous protein. these tumors arise currently two clinical problems: 1 , nosological problems and , or differential diagnosis with other smarcb1-deficient tumors, increasingly described since the generalization of the use of the anti-smarcb1 immunohistochemistry, 2 , a very poor prognosis despite intensive treatment project: to better describe mrts, we also plan to conduct a comparative study of transcriptomes of smarcb1-deficient tumors of various histologies (epithelioid mpnst, epithelioid sarcomas,...). we will compare the transcriptome of these tumors with that already obtained for around 40 human rhabdoid tumors. we will thus try to identify common features that may reveal the general consequences of smarcb1 inactivation, but also the characteristics presumably specific for each histological type, in particular rhabdoid tumors. this approach might help to address the nosological issues raised by the increasing number of smarcb1-deficient tumors with uncertain differential diagnosis. this biological definition of rt might also help in validating the murine models. indeed, pubished smarcb1 ko leads to smarcb1-deficient tumors that do not fully recapitulate human rt. hence, we are developing a genetically-engineered mouse model with inducible inactivation of smarcb1 (flox , flox- cre-ert). these mice almost constantly develop within 10-12 weeks smarcb1-deficient tumors sharing strong phenotypic homologies with human rt. comparative analyses of transcriptomes of human and murine tumors are ongoing to confirm this homology. after validation, we will use this model to develop strategies for experimental therapeutics. treatment in vivo will be preceded by in vitro studies on rtcell lines- in particular, we will study the effect on cell cycle and apoptosis of many chemical compounds , drugs using a high throughput screening platform (biophenics, institut curie). we will also pursue the identification synthetic lethal genes. at this aim we will infect modified rt cell lines (able to express or not smarcb1 upon controlled conditions) with a large library of shrna. finally, molecules of interest will be tested on our mouse model. analyses will focus on survival but also on tumor response (ultrasonography, pet-scan) and deeper analyses of the treated tumours (histology, transcriptomes). expected results: the high tumor penetrance and the rapid tumours growth makes our mouse model very much appropriate for experimental therapeutics. high-throughput treatment of cell lines will allow to rapidly select compounds , drugs that are the most likely to prove efficacy on our model. hence, we expect to settle a very effective strategy to prepare early clinical trials in pediatrics. at the same time, the comparative studies of various smarcb1-deficient tumors should offer to better define the specificity of “rhabdoid tumors” and potentially identify some discriminating markers useful in diagnosis. by defining a coherent "rhabdoid entity" based on expression features, we expect to help clinicians and pathologists to confirm their diagnoses and treatment decisions.