rôle et interactions des différents sous types de lymphocytes t immunorégulateurs après allogreffe de cellules souches hématopoïétiques (csh) : identification de nouveaux partenaires impliqués dans le développement des réponses anti-tumorales et anti-infectieuses sans réaction du greffon contre l’hôte.

contexte scientifique : l’allogreffe de cellules souches hématopoïétiques (csh) demeure le seul traitement curatif dans la plupart des hémopathies malignes. cependant son effet anti-tumoral (gvt) est souvent associé au développement d’une réaction du greffon contre l’hôte (gvh) et à un défaut de reconstitution immunitaire anti-infectieuse. chez l’homme, nous avons préalablement montré que la reconstitution après allogreffe en lymphocytes nkt invariants (inkt) du donneur était associée à une survie significativement prolongée du fait d’une diminution du risque de gvh aiguë (gvha) et la préservation de l’effet gvt. le caractère prédictif et protecteur des inkt sur la gvha est peu ou pas connu chez l’homme et les mécanismes d’action des inkt, notamment leurs potentielles interactions avec les différents régulateurs et acteurs de la réponse allogénique, restent à explorer. descriptif du projet : notre projet a pour but, d’une part, de montrer que la reconstitution post-allogreffe et, ou le contenu du greffon en certaines populations lymphocytaires t immunorégulatrices peuvent prédire précocément l’évolution clinique post-greffe et, d’autre part d’explorer les mécanismes immunologiques sous-jacents. pour cela, nous proposons d’analyser, dans des cohortes homogènes de patients allogreffés et leur donneurs, les niveaux d’expression, reconstitution en lymphocytes inkt et autres populations cellulaires impliquées dans la réponse immune allogénique (t regs, lymphocytes t invariants associés aux muqueuses (mait), t ou effecteurs t à spécificité anti-virale) en corrélant les résultats aux événements cliniques survenant après la greffe (gvh, infections, rechute, survie). ce travail sera réalisé sur une cohorte de 120 adultes greffés dans 4 centres de greffe parisiens (hôpitaux de necker, saint antoine, saint louis et la pitié salpêtrière) et une cohorte de 60 enfants (hôpital robert debré). les prélèvements séquentiels de sang périphérique des patients permettront, d’une part, l’analyse en cytométrie en flux des populations lymphocytaires d’intérêt et, d’autre part, l’étude des capacités fonctionnelles des cellules inkt (expansion et sécrétion de cytokines ex vivo). ces analyses seront réalisées en parallèles chez les donneurs correspondants sur un prélèvement sanguin réalisé avant le don de csh et sur les greffons (services de thérapie cellulaire de necker, la pitié salpétrière et saint louis). en complément, nous prévoyons d’analyser les effets et les mécanismes d’action des inkt cd4+ versus cd4- humains dans le contrôle de la réponse allogénique in vitro via leur potentielles interactions avec les cellules présentatrices d’antigène et les lymphocytes t régulateurs. selon ces résultats, nous testerons les effets des sous types de inkt humains issus de donneurs sains sur les effets gvh, gvt dans un modèle préclinique d’allogreffe humanisée. résultats attendus : ce travail devrait permettre de (1) mettre en évidence une nouvelle approche, utilisable en clinique, prédisant précocément la survenue de gvha chez l’homme selon les caractéristiques des lymphocytes inkt du greffon et, ou celles reconstituant chez le receveur après l’allogreffe,(2) décrire les corrélations entre les différentes populations lymphocytaires régulatrices et la reconstitution immunitaire t globale et spécifique antivirale après allogreffe de csh, (3) mieux comprendre les mécanismes d’action des différents sous types de inkt humains dans la régulation de la réponse allogénique et, (4) démontrer l’intérêt thérapeutique des inkt pour contrôler la gvh aigue sans affecter l’effet gvt dans un modèle préclinique murin humanisé. l’objectif final est de développer de nouvelles stratégies d’immunomodulation post-greffe, applicables chez l’homme, qui permettraient de contrôler la gvh tout en préservant la gvt et la reconstitution immunitaire après allogreffe de csh.

scientific context: allogeneic hematopoïétic stem cell transplantation (hsct) remains the only curative treatment in most hematological malignancies. however, its anti-tumor effet (gvt) is often associated with the development of a graft versus host disease (gvhd) and impaired immune anti-infectious responses. we previously showed that donor-derived invariant nkt (inkt) cell reconstitution after allogeneic hsct in humans was associated with a significant prolongation of overall survival due to decreased risks of acute gvhd (agvhd) with a preserved gvt effect. the predictive and protective features of inkt cells on the development of agvhd are not or poorly known in humans and their mechanisms of action, in particular their potential interactions with the other regulatory effectors and immune actors of the allogeneic response, remain to be explored. description of the project: our project aims, first, to show that the post-transplant reconstitution and, or the content of the graft in some immunoregulatory t lymphocytes can early predict the post-transplant clinical outcome and, second, to explore the underlying immunological mechanisms. for that, we propose to analyse, in homogeneous cohorts of allografted patients and their donors, the levels of inkt cells and other cell poplations implicated in the allogeneic immune response (tregs, mucosa-associated invariant t (mait) cells, t and anti-viral specific t cells) and correlate the results to the post-transplant outcome (gvhd, infections, relapse, survival). this study will be perfomed in a cohort of 120 adult allografted patients in four transplant departments in paris (hospitals of necker, saint antoine, saint louis and la pitié salpétirère) and in a cohort of 60 allografted paediatric patients (robert debré hosipal in paris). sequential blood samples of patients will be drawn to monitor the immune reconstitution of the different lymphocyte populations of interest by flow cytometry and perform functional studies on inkt (ex vivo expansion capacities and cytokine production). these analyses will be also performed in the corresponding donors from blood samples collected before the collection process and from the grafts (obtained by the cell therapy departments of necker, la pitié salpétrière and saint louis hospitals). in addition, we plan to analyse the effect of, and the mechanisms by which, human cd4- and cd4+ inkt cells might control the allogeneic response in vitro, particularly via their potential interactions with dendritic cells and tregs. according to the results of the mechanistic studies, we will test the effect of human subtypes of inkt cells on the gvh, gvl affects in a preclinical humanized mouse model of allogeneic hsct. expected results: this work should allow to (1) describe a new approach, applicable in clinical practice, that could early predict the occurrence of agvhd in humans based on the caracteristics of inkt cells content in the graft and, or those reconstituing in the recipient after allogeneic hsct, (2) analyse the correlations between the different regulatory lymphocytes populations and the global plus antiviral specific t cell immune recovery after alllogeneic hsct, (3) better understand the mechanisms of action of the different subtypes of human inkt cells in the regulation of the immune allogeneic response and, (4) demonstrate the potential therapeutical interest of inkt cells in contrling gvhd while preserving the gvt effect in a preclinical humanized mouse model. our final goal is to develop new strategies of post-transplant immunomodulation, applicable to patients, that could control gvhd while maintening the gvt effect and the immune reconstitution after allogeneic hsct.