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les leucémies lymphoblastiques pré b (lal pré b) sont les plus fréquentes des leucémies de l’enfant. malgré les progrès majeurs réalisés ces deux dernières décennies, 20% des enfants sont réfractaires ou rechutent malgré des traitements intensifs comprenant une transplantation médullaire. nous avons désormais les moyens d’identifier de façon fiable les patients présentant un risque élevé de rechute grâce à la mesure de la maladie résiduelle avant ou après la transplantation. néanmoins, il n’existe pas à l’heure actuelle de thérapeutique véritablement préventive chez les patients identifiés comme étant à risque élevé de rechute. de même, les patients qui rechutent après transplantation médullaire sont le plus souvent incurables. globalement, la survie globale à 5 ans de cette cohorte d’enfants à très haut risque de rechute est de moins de 10%. il est donc urgent de disposer de nouvelles approches thérapeutiques afin de prévenir la rechute chez ces patients. nous proposons d’accroître la réponse immunitaire anti leucémique après transplantation médullaire allogénique au moyen d’une approche innovante utilisant le transfert de lymphocytes t cytotoxiques chimériques. cette stratégie permet de contourner l’absence fréquente d’antigène tumoral à la surface des blastes leucémiques en redirigeant des lymphocytes t de façon à ce qu’ils reconnaissent une molécule de surface exprimée par toutes les cellules tumorales chez une majorité de patients, de manière indépendante du complexe majeur d’histocompatibilité. cd19 est une cible de choix pour cette stratégie car il est présent à fortes concentrations à la surface de la quasi-totalité des lal pré b mais n’est pas exprimé par les autres lignées hématopoïétiques ni les tissus non hématopoïétiques. en particulier, il n’est pas exprimé par les plasmocytes. nous avons conçu un rétrovirus recombinant pour le gène codant pour un récepteur t chimérique consistant en un domaine de ciblage spécifique du cd19 dérivé d’un scfv (single chain variable fragment) d’une immunoglobuline monoclonale anti cd19 que nous avons couplé avec le domaine de signalisation cd3 (zeta). des travaux préliminaires montrent que des lymphocytes t transduits au moyen de ce vecteur lysent des lignées de lal ainsi que des blastes leucémiques primaires, tant in vitro que in vivo dans un modèle murin nod-scid. aucune toxicité attribuable aux lymphocytes t chimériques n’a pu être observée chez l’animal. nous proposons d’administrer des lymphocytes t du donneur (de moelle osseuse) modifiés afin qu’ils reconnaissent et détruisent les blastes de lal. cette modification est réalisée au moyen de notre rétrovirus de grade clinique. nous administrerons ces lymphocytes t chimériques anti cd19 dans les suites d’une greffe de moelle allogénique chez des patients présentant une récidive de leur leucémie (sous la forme d’un accroissement de leur maladie résiduelle) (groupe préemptif) ou étant à très haut risque d’une rechute (groupe prophylactique). notre hypothèse est que cette immunothérapie au moyen de lymphocytes t chimériques anti cd19 améliorera le rejet des blastes leucémiques voire en préviendra la récidive. nous utiliserons des lymphocytes t du donneur spécifiques pour le virus d’ebstein-barr (ebv) afin de limiter le risque de maladie du greffon contre l’hôte (gvh) et optimiser la persistance de la réponse immunitaire chez des receveurs séropositifs pour l’ebv. notre deuxième hypothèse est que cette lymphodéplétion préalable permettra également d’éliminer des lymphocytes t régulateurs susceptibles d’altérer le fonctionnement des lymphocytes t chimériques anti cd19 . si la persistance in vivo des lymphocytes t chimériques anti cd19 s’avère insuffisante, nous proposons d’étudier une deuxième cohorte de patients chez lesquels nous administrerons une préparation vaccinale de grade clinique consistant en une lignée de cellules (dérivées du donneur) lymphoblastoïdes irradiées transformées par l’ebv afin de permettre la stimulation des lymphocytes t chimériques anti cd19 . l’étude que nous proposons a donc pour but d’établir la faisabilité et l’innocuité d’une immunothérapie ciblée dirigée contre l’antigène leucémique cd19. cette approche possède non seulement un intérêt majeur pour tenter de réduire l’incidence des rechutes post allogreffes chez des enfants à très haut risque de récidive mais également pour toute autre pathologie maligne comportant un ou des antigènes associés capables d’être reconnus par des lymphocytes t chimériques.

b cell precursor acute lymphoblastic leukaemia (bcp-all) is the commonest cancer in childhood. despite major advances, 20% of children fail currently available therapies, including haemopoietic stem cell transplant. we can reliably identify patients at highest risk of relapse after transplant by assessing minimal residual disease, but at present there is no available therapy to prevent relapse in such patients. similarly, patients who relapse after stem cell transplant are currently incurable. novel therapeutic strategies are urgently needed to prevent relapse in such patients. in this study we propose to augment the immune response against leukaemia after stem cell transplant using the novel approach of chimaeric t-cell receptor transfer. this strategy overcomes the lack of immunogenic tumour antigens on leukaemic cells by redirecting t cells to surface molecules expressed by malignant cells, enabling us to target tumour cells in an hla-independent fashion, so that a single vector can be used to treat all patients expressing this surface molecule. cd19 is an excellent target for this strategy, because it is highly expressed on the surface of almost all bcp-alls, but is absent on other lineages and on non-haemopoietic cells.we have generated an oncoretroviral vector coding for a chimaeric t-cell receptor consisting of a cd19-specific single chain fv targeting domain that activates t cells via the cd3 signalling domain. previous studies have demonstrated that t cells transduced with such a vector efficiently lyse all cell lines and primary blasts both in vitro and in a nod, scid murine model. no significant toxicity attributable to transduced t cells was observed in this murine model. we now propose to administer donor t cells redirected to recognise and kill all blasts by retroviral transduction with a cd19 chimaeric t-cell receptor in patients who develop evidence of minimal residual disease after stem cell transplant or those undergoing a second transplant procedure. our hypothesis is that immunotherapy with cd19-specific t cells will improve the immune response against leukaemic cells and may prevent relapse after transplant. ebv-specific cytotoxic t cells will be used as effectors to reduce the potential for graft-versus-host disease and optimise the durability of responses. our study utilizes an integrated approach to immunotherapy, including the use of transduced ebv-ctl as effectors, administration in a setting of minimal residual disease and lymphodepletion to improve in vivo expansion of the infused ctl. if the in vivo survival of cd19-specific ctl is poor in the initial patients, a further cohort will be vaccinated with irradiated ebv-transformed lymphoblastoid cell lines following ctl infusion to stimulate their proliferation to determine if this improves in vivo survival, expansion. this study will thus establish the feasibility and safety of adoptive immunotherapy with cd19-specific t cells and will provide the necessary foundations for further studies to assess the efficacy of cd19-specific t-cell transfer in reducing relapse after sct. such an approach may be of major benefit to patients with high-risk all and has important broader implications for other malignancies which may be targeted similarly using the novel approach of chimaeric t-cell receptor transfer.