nouvelles stratégies pour détecter les cancers chez les porteurs de mutations germinales de rb1 : tests sanguins basés sur les plaquettes éduquées par la tumeur ou les vésicules extracellulaires.

contexte rb1 est un gène paradigmatique pour les cancers héréditaires. presque tous les porteurs de mutation constitutionnelle du gène rb1 développent un rétinoblastome durant l’enfance et parmi les survivants, plusieurs développent secondairement d’autres cancers primaires au cours de la vie (notamment des sarcomes et des mélanomes), qui leur sont souvent fatals. aujourd’hui, aucun protocole standard n’est disponible pour la détection précoce de ces autres cancers. récemment, des tests sanguins de diagnostic du cancer sont apparus, offrant de nouvelles possibilités pour la surveillance. nous avons développé de nouveaux tests non-invasifs qui exploitent l’intérêt pour le diagnostic des plaquettes eduquées par la tumeur (tep) ou des vésicules extracellulaires (ev). hypothèse les tests sanguins pourraient être exploités dans des stratégies de surveillance chez les individus avec prédisposition à des cancers héréditaires. ces tests sanguins nécessitent d’être calibrés relativement à une référence non tumorale - celle-ci pourrait être différente chez des survivants d’un rétinoblastome non atteints d’un second cancer et chez des sujets sains jamais atteints par le cancer. buts le but de ce projet est de développer des tests sanguins non invasifs, basés soit sur les plaquettes (tep), soit sur les ev, pour la détection précoce, voire la stratification des rétinoblastomes et des tumeurs secondaires chez les porteurs de mutation héréditaire du gène rb1. comme objectifs secondaires, nous souhaitons i) initier la collecte systématique et extensive de sang et de tissus cancéreux chez les porteurs de mutation héréditaire de rb1 ayant eu d’autres cancers et ii) déterminer la référence non tumorale chez les survivants de rétinoblastomes (liés à une mutation héréditaire de rb1) n’ayant pas fait d’autres cancers. méthodes i) trois sites collecteront les informations cliniques. ii) le sang sera collecté chez 153 adultes porteurs de mutation héréditaire de rb1 non atteints d’autres cancers. iia) l’arn isolé des plaquettes (tep) sera analysé par rna-seq. le profil arn des porteurs de mutation rb1 sera comparé à celui de 153 sujets sains (contrôles). iib) l’adn sera isolé à partir des ev et le déséquilibre allélique au site de rb1 sera testé et comparé à 153 contrôles. iii) le sang de 40 enfants atteints de rétinoblastome sera collecté et comparé à celui de 40 échantillons de contrôle prélevés sur des enfants non atteints de cancer. les tep et ev seront isolés. on déterminera alors si le rétinoblastome peut être détecté via ces tests sanguins. iv) pour les patients, adultes ou enfants, atteints d’autres cancers (post-rétinoblastome), nous effectuerons une analyse pilote des tep et ev et collecterons des échantillons de ces cancers. résultats attendus et impact potentiel cette étude apportera des niveaux de référence pour les tests basés sur les tep et les ev chez les survivants d’un rétinoblastome héréditaire. de plus, nous déterminerons si ces tests peuvent être utilisés pour la détection, voire la stratification, des rétinoblastomes et des tumeurs secondaires. ces études prépareront le terrain à l’utilisation de tests sanguins pour la détection d’autres cancers (post-rétinoblastome). les résultats obtenus devraient favoriser le développement de tests non-invasifs de diagnostic des cancers en général. la collaboration unique entre chercheurs fondamentaux et cliniciens de centres nationaux de référence pour le rétinoblastome, et les inventeurs de tests sanguins innovants pour le diagnostic des cancers devrait contribuer fortement au succès de ce projet.

background rb1 is a paradigm gene for heritable cancer. almost all rb1 mutation-carriers develop retinoblastoma (heritable-rb-patient) during childhood and many heritable-rb-survivors develop second primary malignancies (spms- notably sarcomas and melanomas) throughout life, which are often fatal. to date, no standard protocols are available for early detection of spms. recently, blood-based cancer tests have opened up encouraging new possibilities for surveillance. we have developed novel non-invasive tests that exploit the diagnostic power of either tumor educated platelets (teps) or extracellular vesicles (evs). hypothesis blood-based methods may be exploited in surveillance strategies for individuals with a heritable cancer predisposition. non-cancer baseline in heritable-rb-survivors might already differ from control individuals. aims the aim of this project is to develop non-invasive blood tests, either platelet- or ev-based, for early detection and stratification of tumors in rb1-mutation carriers (nirbtest: non-invasive rb1 cancer test). as secondary aims, we will i) initiate the systematic and comprehensive biobanking of blood and cancerous tissues from rb1-mutation carriers with spms and ii) determine non-cancerous (no-spm) baseline in heritable rb-survivors. methods i) three sites will collect applicable clinical information. ii) blood will be collected from 153 adult rb1-mutation carriers without spms. iia) rna isolated from platelets will be analysed with next generation rna sequencing. the rna profiles of rb1-mutation carriers will be compared to 153 control individuals. iib) dna will be isolated from evs and tested for allelic imbalances at the rb1 locus and compared to 153 controls. iii) blood will be collected from 40 children with rb and compared to 40 pediatric control samples. again platelet-derived rna and ev-derived dna will be isolated. subsequently, we will determine whether rb can be detected via blood based tests. iv) for participating individuals presenting with spms (either pediatric or adult), we will analyse the platelet-derived rna or ev-derived dna (pilot) and biobank cancer specimens. expected results and potential impact this study will yield baseline levels for the platelet- and the ev- test in heritable-rb-survivors. moreover, we will determine whether these tests can be used for rb detection, stratification. importantly, these studies will set the stage for the use of blood-based tests for the detection of spms. the obtained results are expected to enhance the development of non-invasive cancer tests in general. the unique collaboration between fundamental researchers, clinicians from national rb-reference centers, complemented with inventors of innovative cancer blood tests will strongly contribute to the success of the project.