evaluation in vitro de l'immunothérapie de l'ostéosarcome à l'aide de lymphocytes t car spécifique du gd2 o-acétylé.

contexte scientifique les récepteurs de l'antigène chimérique (car) sont des protéines recombinantes qui relient les domaines de liaison des antigènes dérivés d'anticorps aux voies de signalisation de stimulation des lymphocytes t. les lymphocytes t, conçus pour exprimer les car spécifiques de l'antigène de la lignée b cd19 (lymphocytes car-t–cd19), induisent et maintiennent les rémissions dans les leucémies et lymphomes précurseurs réfractaires à cellules b. le développement des cellules car-t pour les tumeurs solides est toutefois limité en raison de la rareté des antigènes exprimés à haute densité sur les cellules cancéreuses, comparativement aux cellules normales. a cet égard, le gd2 o-acétylé (oacgd2) offre de réelles opportunités pour développer une thérapie cellulaire car-t sure et efficace contre les ostéosarcomes (oss). description du projet objectifs et méthodes - mon objectif est d'obtenir la preuve de concept que l'oacgd2 constitue un antigène cible approprié pour l'immunothérapie cellulaire car-t. tout d'abord, j'étudierai l'expression de l'oacgd2 dans les lignées cellulaires oss et les biopsies de tumeurs oss. deuxièmement, j'analyserai l'expression de l'oacgd2 lors de la régulation épigénétique induite par l’inhibition de l'enhancer of zeste homolog 2 (ezh2). enfin, j'évaluerai l'efficacité des cellules car-t–oacgd2 contre les cellules oss. j'effectuerai des analyses de cytométrie de flux et d'immunochimie pour étudier l'expression de l'oacgd2 dans les lignées cellulaires oss et les biopsies de patients. pour induire l'expression du gd2, je vais inhiber l'enhancer of zeste homolog 2 (ezh2) à l'aide d'agents épigénétiques mis au point dans le laboratoire de claudia rössig. ensuite, j’analyserai la corrélation de l'augmentation de l'expression de gd2 à une l’induction de l’oacgd2. enfin, je comparerai l'efficacité cytolytique des lymphocytes car-t oacgd2 avant et après l'inhibition de ezh2. j'inclurai les cellules car-t gd2 comme témoin positif. état d'avancement du projet mon laboratoire d’accueil a démontré que l'inhibition d'ezh2 permet d’induire la cytotoxicité des cellules t gd2-car, en induisant l'expression de gd2. mon laboratoire de nantes a démontré que l'immunothérapie anti-oacgd2 a le potentiel d'améliorer considérablement la tolérance de l'immunothérapie anti-gd2. toutefois, il reste à déterminer si la reconnaissance sélective de l'oacgd2 est préférable pour les approches cellulaires car-t dans les tumeurs oss. résultats attendus comme l'inhibition de l'ezh2 augmente l'expression du gd2 dans les cellules tumorales, je m'attends à voir une augmentation de l'expression de l'oacgd2, ce qui augmentera la sensibilité des cellules oss à la thérapie cellulaire car t-oacgd2.

scientific context chimeric antigen receptors (car) are recombinant proteins that link antibody-derived antigen binding domains to stimulatory t cell-signaling pathways. t cells engineered to express cars against the b lineage antigen cd19 (cd19–car-t cells) are active and induce and maintain remissions in refractory b cell precursor leukemias and lymphomas. the development of car t cells for solid tumors is, however, limited by the paucity of antigens expressed at high densities on cancer cells, but not normal cells. in this respect, o-acetyl gd2 (oacgd2) provides real opportunities to develop safe and effective car t cell therapy for osteosarcoma (oss). project description aims and methods : my goal is to obtain the proof of concept that oacgd2 constitutes a suitable target antigen for car-t cell immunotherapy. first, i will study oacgd2 expression in oss cell lines and oss tumor biopsies. second, i will address oacgd2 expression upon epigenetic regulation by ezh2 inhibition. finally, i will assess the efficacy of oacgd2–car-t cells against oss cells. i will perform flow cytometry- and immunochemistry-analysis to study oacgd2 expression in oss cell lines and patients biopsies, respectively. to enhance gd2 expression, i will pharmacology inhibit the enhancer of zeste homolog 2 (ezh2) using epigenetic agents developed in prof. med. rössig’s laboratory. then i will correlate the increased gd2 expression to an up-regulated oacgd2 expression. finally, i will compare the efficacy of oacgd2–car-t cell cytolysis before and after zh2 inhibition. i will include gd2–car-t cell as a positive control. project progress status my host laboratory has demonstrated that ezh2 inhibition of ezh2 enable effective gd2–car-t cell killing by upregulating gd2 expression. my laboratory in nantes demonstrated that anti-oacgd2 immunotherapy has the potential to drastically improve the tolerance of anti-gd2 immunotherapy. however, it reamains to be determined whether selective recognition of oacgd2 is preferable for car-t cell approaches in oss tumors remains to be elucidated. expected results since ezh2 inhibition increases gd2 expression in tumor cell, i expect to see an increase expression of oacgd2, which will increase oss cell sensitivity to oacgd2–car-t cell therapy.